2018 年，本院于剑桥国际干细胞研讨会上，发表了自主研发的无血清培养基（HELENE Medium）相关成果。
其一，在相同培养期间内，HELENE Medium 可培养出比其他市售培养基更多的细胞；
其二，使用 HELENE Medium 培养的间充质干细胞，其细胞尺寸最小。相关学术研究指出，干细胞尺寸越小，越不容易分化为成纤维细胞。
综合这两点，可以确认从耳后采集的脂肪组织含有MSCs。虽然收集的脂肪量比大腿或腹部的脂肪量少，但我们专有的实验室技术和 HELENE 培养基可以在一个月内培养多达 22.5 亿个 MSCs。
为了确保我们提供给患者的干细胞质量，我们采用与本质量证书相同的流程，将干细胞样本检测外包。该检测符合再生医学领域的GMP（良好生产规范）和GLP（良好实验室规范），并包含三项独特设计的实验。我们在自己的实验室进行同等检测后才会提供细胞，并且我们还在此附上第三方检测公司对提供给患者的干细胞质量的验证结果。
我们在医院实验室培养了来自三位样本提供者的脂肪组织，并将其送检。样本取自耳后，采用特殊技术和专用酶对组织进行分离和分解。单个细胞培养一个月后，达到所需数量，使用MACS进行分离，并通过细胞计数器确认细胞计数后，送至第三方检测公司Takara Bio Inc.进行检测。
| 测试目标 | 测试名称 | 规格示例 | 结果 |
|---|---|---|---|
| 感染、污染 | 无菌测试 （日本药典直接法选项：方法适用性试验） |
QC_AL Lot:#13349 | 消极的 |
| 无菌测试 （日本药典，直接法） |
QC_AL Lot:#13349 | 消极的 | |
| 支原体检测阴性 （参考资料来自日本药典：PCR 方法（确认 7 种细菌的稀有性）） |
QC_AL Lot:#13349 | 消极的 | |
| 内毒素试验 （日本药典动力学浊度法选项：干扰因素测试） |
QC_AL Lot:#13349 | 消极的 | |
| 内毒素试验 （日本药典动力学浊度法） |
QC_AL Lot:#13349 | 检测精度低于 | |
| 肿瘤形成 | 菌落形成试验 | QC_AL Lot:#13349 | 消极的 |
| 干细胞确认 | FCM 测试 (CD45-CD105+) |
QC_AL Lot:#13349 | CD45- 92.1％ CD105+ 100% |
上图是脂肪组织的示意图；图中圆形、豆状的物体就是脂肪组织。干细胞存在于一种称为干细胞微环境的纤维网状区域。换句话说，干细胞并不存在于脂滴中，而是存在于周围的纤维区域中。
现在，让我们总结一下耳后脂肪和腹部脂肪的区别。
| 耳后脂肪 | 腹部皮下脂肪 | |
| 外观照片 |  |
 |
| 数字 |  |
 |
| 疼痛 | 很少 | 剧烈（像瘀伤一样疼痛） |
| 内出血 | 非常罕见 | 许多 |
| 压缩 | 仅用绷带加压包扎 | 纱布压迫 |
脂肪来源细胞并不位于黄色脂滴内部，而是位于脂滴周围的区域，即基质（干细胞微环境）。
干细胞存在于腹部脂肪和耳后脂肪中，但脂肪滴较少、间质组织较多的脂肪中干细胞的比例较高。
在海伦，我们主要从耳后提取脂肪，这样可以最大限度地减少患者的疼痛。
然而，对于那些偏爱腹部脂肪的人来说，也可以通过腹部抽脂术来获取。
在海伦细胞中心培养的干细胞，在输注给客户之前，至少会进行两次检测，以确认其数量和活性。检测结果经实验室审核并打印。我们以科学负责的态度为所有客户提供服务。
获取细胞样本后，使用0.4%太攀蓝溶液进行染色。太攀蓝是一种常用的活细胞染色剂，用于区分活细胞和死细胞。该染色方法属于染料排除法，利用染料能够渗透死细胞但会被活细胞的细胞膜阻挡这一特性来区分活细胞和死细胞，从而计算细胞活力。传统上，染色后的样本需要在显微镜下观察并进行人工计数，但自动细胞计数器可以自动识别荧光信号并完成分析。人工计数不仅需要手动对焦，还需要调整样本间的明场光强度。Countess II FL自动细胞计数器可在使用过程中自动调节照明和焦距，以获得最佳图像质量。
使用 Countess II FL 测定细胞数量后，我们的细胞中心将细胞样本置于载玻片上，并使用蔡司 Axio Vert.A1 显微镜采集细胞图像。利用 HELENE 自主研发的 AI 图像读取程序，我们在共聚焦水平上观察细胞骨架，并结合显微镜的焦距、细胞类型（MSC）和细胞培养瓶的横截面积，计算细胞数量和活力。这两个步骤实现了近乎 100% 的计算准确率，打造出独一无二的流程，确保 HELENE 品牌的治疗级干细胞能够精准满足客户需求，并始终保持最佳状态。
HELENE 诊所会在每次治疗后提供干细胞证书，以体现其对质量和透明度的承诺。
根据2021年发表的一篇题为《过去15年间充质干细胞疗法的安全性：一项荟萃分析》的论文，研究人员选取了62项研究进行分析，其中包括发表在国际知名期刊《柳叶刀》上的临床试验摘录。在这些临床试验中，共使用了超过5亿个，甚至在某些情况下高达10亿个间充质干细胞，这消除了人们的误解，并证实了海伦诊所的技术能力，其水平与世界一流的研究机构不相上下。
| Author | Year | Location | Dose | |
|---|---|---|---|---|
| Hess | 2017 | USA | 1200×106 cells | 12亿个干细胞 |
| Bartunek | 2013 | Belgium | 600 -1200×106 cells | 60亿至12亿个干细胞 |
| Chanbers | 2017 | Australia | 1×109 cells | 10亿个干细胞/肺损伤 |
| Steinberg | 2017 | USA | 1×109 cells | 10亿个干细胞/中风 |
| Igresias | 2021 | Mexico | 1×109 cells | 10亿个干细胞/肺损伤 |
| Matsuoka | 2024 | Japan | 1-2×109 cells | 20亿个干细胞/抗衰老 |
大量临床数据表明，低剂量间充质干细胞（MSCs）在某些情况下可能无效，因为目前尚无针对特定疾病的低剂量MSCs治疗案例。在不久的将来，随着科学数据和研究的更新，有必要不断改进和规范MSCs治疗方案、目标人群、来源、培养方法和剂量差异，以便更好地比较相关临床试验的结果。在此之前，海伦诊所将继续改进其治疗方法，通过根据患者的年龄、健康状况和疾病制定不同细胞和外泌体剂量的回输方案，确保在完全安全的前提下提供最佳的干细胞治疗。
[引用] MSC 疗法过去 15 年的安全性：一项荟萃分析。
https://doi.org/10.1186/s13287-021-02609-x
| 诊所开放时间 | 10:00～19:00 |
|---|---|
| 休息日 | 星期日、每月第一和第三个星期三 |
| 地址 | 107-0062 东京都港区南青山5-9-15 青山大本大厦3楼 |
| 电话 | 03-3400-2277 |